探针和引物之间的区别

主要区别——探针与引物

PCR 是一种生物技术中用于扩增特定 DNA 片段以用于各种目的的技术。探针和引物是两种类型的单链寡核苷酸，用于各种类型的 PCR。探针主要用于 qPCR，而合成引物则用于各种类型的 PCR。这 主要区别 探针和引物之间是探针是 探针用于通过与双链 DNA 杂交检测混合物中特定 DNA 片段的存在，而引物用于通过与单链 DNA 杂交引发聚合酶链反应.通常，引物用于启动细胞内的 DNA 复制。探针也用于杂交反应。

涵盖的关键领域

1. 什么是探针 – 定义、设计、重要性 2. 什么是引物 – 定义、设计、重要性 3.探针和引物有什么相似之处 – 共同特征概要 4. 探针和引物有什么区别 – 主要差异的比较

关键词：杂交、寡核苷酸、PCR、引物、探针、QPCR

什么是探针

探针是 DNA 或 RNA 片段，用于检测样品中特定 DNA 片段的存在。因此，探针可用于两种类型的技术，即 qPCR 和杂交反应。在设计探头时应考虑四个因素。

地点 – 探针应与靠近反向或正向引物的 DNA 链杂交。但是，它不应与引物结合位点重叠。通常，探针与 DNA 双链体的任一链杂交。
熔化温度（Tm） – 探针的解链温度应比引物的解链温度高 6-8 °C。
退火温度（Ta） – 实验的退火温度应比引物的熔解温度低 5 °C。
GC含量 – 探针的 GC 含量应为 35-65%。探针的 5' 端不应包含 G。

在 qPCR 中，探针用荧光染料或放射性元素标记。这些探针与 DNA 双链体中的目标序列杂交。不同类型的标记探针（带有放射性元素或荧光）也用于各种类型的杂交反应。 PNA探针与其靶序列的杂交如图1所示。 PNA 探针用于确定端粒的长度。

图 1：PNA 探针的杂交

在杂交过程中，探针以互补方式与单链 DNA 结合。

什么是引物

引物是指 DNA 或 RNA 的短链，作为 DNA 合成的起点。在细胞内使用 RNA 引物在 DNA 聚合酶的帮助下启动 DNA 复制。合成 DNA 引物主要用于 PCR 以扩增所需的 DNA 片段。目标序列的两侧是两个引物，称为正向引物和反向引物。 特异性 和 互补性 是引物设计的主要因素。还应避免二级结构。设计引物时应考虑的其他因素如下所述。

熔化温度（Tm） – 正向和反向引物的最佳熔解温度应为 60-64 °C。
退火温度 – 实验的退火温度应比每个引物的熔解温度低 5 °C。
GC含量 – 引物的 GC 含量应为 35-65%。

正向和反向引物与目标 DNA 的两条链的退火如图 2 所示。

图 2：引物退火

在 DNA 测序中，引物用于扩增目标片段。引物可以用放射性元素或荧光标记以用于各种检测目的。

探针和引物之间的相似之处

定义

探测： 探针是 DNA 或 RNA 片段，用于检测样品中特定 DNA 片段的存在。

入门： 引物是 DNA 或 RNA 的短链，作为 DNA 合成的起点。

角色

探测： 探针用于检测 qPCR 中的特定 DNA 片段。

入门： 引物用于启动 DNA 复制。它还用于启动 PCR。

长度

探测： 探针的长度范围为 25-1000 个碱基对。

入门： 引物的长度范围为 18-22 个碱基对。

杂交

探测： 探针与双链 DNA 杂交。

入门： 引物与单链 DNA 杂交。

结论

探针和引物是用于各种类型 PCR 的两种单链寡核苷酸。探针用于检测 qPCR 中的特定 DNA 片段。引物用于启动细胞内的 DNA 复制，也用于启动 PCR。因此，探针和引物之间的主要区别在于它们的用途。

参考：

1. 设计 PCR 引物和探针，集成 DNA 技术，可在此处获得。

图片提供：

1. “Q-FISH 工作流程”，作者 Jclam 在英文维基百科 (CC BY 3.0) 上通过 Commons Wikimedia2。 Richard Wheeler (Zephyris) 的“Primers RevComp Elongation” – 通过 Commons Wikimedia 自己的作品 (CC BY-SA 3.0)