胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可切割肽 C 端的赖氨酸和精氨酸残基。 它是细胞培养中使用最广泛的酶，用于从培养容器表面释放贴壁细胞。 胰蛋白酶很容易被培养物中生长的大多数细胞类型耐受。通过在培养基中加入血清，它的活性很容易被中和。胰蛋白酶的这两个特征有助于它们在细胞培养中的应用。通常，胰蛋白酶与 EDTA 一起添加到细胞培养物中。本文描述了胰蛋白酶在细胞培养中的作用。

涵盖的关键领域

1. 什么是胰蛋白酶 – 定义、特征、功能 2. 胰蛋白酶如何在细胞培养中发挥作用 – 胰蛋白酶在细胞培养中的作用

关键词：粘附蛋白、细胞粘附、消化酶、胰蛋白酶、胰蛋白酶化

什么是胰蛋白酶

胰蛋白酶是一种消化酶，可分解许多脊椎动物消化系统中的蛋白质。它存在于胰液中。胰蛋白酶裂解肽羧基末端的赖氨酸和精氨酸残基。然而，当这两个氨基酸后跟果仁糖时，它不会切割它们。胰蛋白酶的活性被用于许多生物技术过程中，胰蛋白酶的作用被称为 胰蛋白酶消化 或胰蛋白酶蛋白水解。胰蛋白酶的晶体结构如图1所示。

图 1：胰蛋白酶

胰蛋白酶作用的最佳 pH 值为 7.6-8.5。通常，酚红用于胰蛋白酶测定以监测上述 pH 范围。酚红在此 pH 范围内呈现粉红色。胰蛋白酶测定在干冰上进行。

胰蛋白酶如何在细胞培养中发挥作用

质膜上的蛋白质负责多种功能，这些功能对于维持细胞的正常生理活动至关重要。一些质膜蛋白（例如钙粘蛋白家族）是用作锚的粘附蛋白，将细胞骨架蛋白连接到细胞外基质。这有助于细胞粘附和细胞迁移。质膜内的粘附蛋白如图 2 所示。

图 2：细胞粘附蛋白

在细胞培养中，可以将胰蛋白酶添加到培养基中，通过消化粘附蛋白从培养容器表面释放粘附细胞。胰蛋白酶还通过消化粘附蛋白从聚集体中释放细胞。 EDTA 还与胰蛋白酶一起添加到细胞培养物中，以螯合培养基中的二价离子。钙和镁离子可能会抑制胰蛋白酶的作用。最终，胰蛋白酶有助于从细胞培养物中获得单个细胞，促进细胞的下游加工。

结论

胰蛋白酶是一种消化肽的光解酶。胰蛋白酶广泛用于细胞培养中，以便在胰蛋白酶消化粘附蛋白并将细胞释放到培养基中时获得单个细胞。

参考：

1. “哺乳动物细胞中细胞继代培养过程中胰蛋白酶诱导的蛋白质组改变。”生物医学杂志，BioMed Central，2010 年 5 月 11 日，可在此处获取。

图片提供：

1. “1UTN” 用户：DrKjaergaard – 自己的作品：来自 PDB 文件 1UTN。通过 Commons Wikimedia 使用 PyMol（公共领域）创建 2.“细胞粘附”，由 ZabMilenko 在英语维基百科 - 使用 CommonsHelper（公共领域）通过 Commons Wikimedia 从 en.wikipedia 转移到 Commons by Premeditated Chaos