蛋白质印迹如何工作
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蛋白质印迹是分子生物学中的一种技术，用于检测样品中的特定蛋白质。它使用 SDS-PAGE 根据蛋白质的大小分离蛋白质，然后将这些分离的蛋白质转移到膜中。该技术使用特定的一抗标记印迹中的特定蛋白质。用报告蛋白标记的二抗用一抗检测标记的蛋白质。
涵盖的关键领域
1. 什么是蛋白质印迹 – 定义、事实、应用 2. 蛋白质印迹如何工作 – 蛋白质印迹过程
关键词：显色、硝酸纤维素膜、一抗、二抗、蛋白质印迹
什么是蛋白质印迹
蛋白质印迹是一种杂交技术，用于检测样品中的特定蛋白质。它也被称为免疫印迹，因为该技术使用抗体来标记感兴趣的蛋白质和检测抗体标记的蛋白质。
图 1：蛋白质印迹
蛋白质印迹最早由 Towbin 于 1979 年开发，目前用作蛋白质分析的常规技术。
蛋白质印迹如何工作
蛋白质印迹主要用于检测样品中的特定蛋白质。蛋白质印迹技术的步骤如下所述。
- SDS-PAGE – 蛋白质样品通过 SDS-PAGE 根据其大小进行分离。
- 将蛋白质转移到膜上 – 将大小分级的蛋白质转移到硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯 (PVDF) 膜中。这种转移涉及的技术是扩散转移。
- 阻止非特定站点 – 膜上未占据的位点被封闭以防止蛋白质的非特异性结合。脱脂奶粉或牛血清白蛋白 (BSA) 可用于此目的。
- 一抗孵育 – 封闭的膜与一抗溶液一起孵育。这些一抗与膜上的特定蛋白质结合。
- 二抗孵育 – 膜与二抗一起孵育，二抗与一抗结合。二抗与报告蛋白偶联。这些报告蛋白可以是生物素、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。
- 通过显色检测蛋白质 – 结合酶报告基因与其底物反应生成有色碱性磷酸酶，将 BCIP 转化为蓝色产物，而辣根过氧化物酶则转化鲁米诺，发出荧光。
图 2：蛋白质印迹法 - 程序
结论
蛋白质印迹是一种杂交技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在。它使用 SDS-PAGE 根据蛋白质的大小和与一抗的结合来分离蛋白质，在显色过程中二抗可以识别这些蛋白质。
参考：
1. “Western Blotting 基本原理，Western Blots 的工作原理。”博士，在这里可用。
图片提供：
1. TimVickers 的“抗硫辛酸免疫印迹” – 通过 Commons Wikimedia 自己的作品（CC BY-SA 3.0） 2. Cawang 的“Western Blotting” – 自己的作品，CC0）通过 Commons Wikimedia
