Southern印迹是一种用于检测样品中特定DNA片段的技术。印迹技术包括通过凝胶电泳根据大小分离 DNA 片段，将大小分级的 DNA 样品转移到滤膜上，将特定 DNA 片段与标记的序列特异性探针杂交，并检测标记的条带。

除了鉴定样品中的特定 DNA 外，特定类型 DNA 的大小和丰度也可以通过 Southern 印迹法确定。本文描述了Southern印迹涉及的过程。

涵盖的关键领域

1. 什么是Southern Blotting – 定义、原理、应用 2. Southern Blotting 如何工作 – 南方印迹的过程

关键词：DNA、凝胶电泳、杂交探针、尼龙膜、限制性消化、Southern Blotting

什么是Southern Blotting

Southern印迹是一种用于鉴定样品中特定DNA的杂交技术。该技术由 Edward M. Southern 于 1975 年首次开发。该过程可识别样本中特定 DNA 序列的 DNA 序列、大小和丰度。

Southern印迹膜如图1所示。

图 1：Southern 印迹膜

Southern印迹的应用

Southern印迹的应用描述如下。

1. 检测特定的 DNA 片段
2. 分离特定的 DNA 片段
3. 识别突变和基因重排
4. 在 RFLP 分析中（限制性片段长度多态性）
5. 识别遗传病
6. 识别传染源
7. 亲子鉴定
8. 在 DNA 指纹识别中识别罪犯

Southern Blotting 是如何工作的

Southern印迹涉及通过凝胶电泳根据大小分离DNA片段，将它们转移到膜上，将它们与标记的序列特异性探针杂交，并检测标记的条带。 Southern印迹的步骤如下所述。

1. DNA消化 – DNA 样品通过限制性内切酶消化获得 DNA 片段，并通过 PCR 扩增这些片段。
2. 凝胶电泳——DNA 片段通过凝胶电泳进行大小分级。
3. 变性 – 将含有分离 DNA 的凝胶浸泡在 NaOH 或 HCl 中，使双链 DNA 变性。
4. 印迹 – 凝胶中的 DNA 片段通过称为印迹的过程转移到带正电荷的尼龙膜中。
5. 烘烤和阻塞 – 将带有 DNA 片段的吸墨纸烘烤以将 DNA 固定在膜上。然后，未占据的结合位点通过用牛血清白蛋白 (BSA) 或酪蛋白处理而饱和。
6. 与标记探针杂交 – DNA 结合膜用标记探针处理，探针包含与感兴趣的 DNA 片段互补的核苷酸序列。杂交探针的长度一般为 100-500 bp，并用放射性核苷酸标记。
7. 通过放射自显影进行可视化 – 在放射自显影下观察结合探针的膜，以获得感兴趣的 DNA 片段的模式。

图 2：Southern 印迹

Southern印迹的整个过程如图2所示。

结论

Southern印迹是一种杂交技术，用于从样品中鉴定特定的DNA序列。在此过程中，DNA 样本通过限制性内切酶进行分离，并将混合物在凝胶上运行。然后，凝胶中的条带图案被转移到尼龙膜上，并与标记探针杂交，从而可以检测到感兴趣的片段。

参考：

1. “南方印迹”。 Thermo Fisher Scientific，可在此处获得。

图片提供：

1. Bojan Žunar 的“Southern 印迹膜” – 自己的作品（CC BY-SA 4.0），来自 Commons Wikimedia2。 “图 17 01 05” 作者：CNX OpenStax – (CC BY 4.0) 通过 Commons Wikimedia