转染效率可以通过计算特定样品中转染的细胞总数来计算。细胞数可以通过两种方法进行计数。最常用的方法是使用易于处理的记者。这些报告基因可以是绿色荧光蛋白 (GFP)、萤光素酶、β-半乳糖苷酶、分泌性碱性磷酸酶 (SEAP)。计算转染效率的最新方法是标记核酸，从而能够跟踪它们的细胞内递送。其他一些方法，如蛋白质印迹、免疫染色和功能测定，也可用于计算转染效率。由于转染效率取决于多个实验参数，因此转染效率的确定是确定各种因素对转染影响的关键。

涵盖的关键领域

1. 计算转染效率的方法有哪些 – 记者系统 2. 如何计算转染效率 – 细胞计数

关键词：流式细胞术、GFP、核酸标记、报告系统、转染效率

计算转染效率的方法有哪些

不同类型的方法用于计算转染效率。

1. 记者系统

– 绿色荧光蛋白 (GFP) – GFP 天然存在于水母中。它通过同时转染 GFP 基因和目的基因，用于对转染细胞进行定性和定量分析。定性分析可以在荧光显微镜下进行。可以通过流式细胞术进行定量分析。除了 GFP，红色荧光蛋白 (RFP) 和黄色荧光蛋白 (YFP) 也可用作报告基因。表达荧光蛋白的大肠杆菌菌落如图 1 所示。

图 1：荧光蛋白

2. 核酸标记 – 荧光标记的质粒可用于转染。然后可以在荧光显微镜下对它们进行计数。

3. 蛋白质印迹、免疫染色和其他功能检测

如何计算转染效率

可以在显微镜下或通过流式细胞术计数显示报告基因的细胞数量和不显示报告基因的细胞数量。显示报告基因的细胞百分比给出了转染效率。

图 2：转染效率

结论

转染效率可以通过确定样品中显示转染 DNA 的细胞数量来计算。细胞数可以在显微镜下计算或使用报告系统通过流式细胞术计算。

参考：

1. “测量转染效率”。 Mirus Bio LLC，可在此处获得。

图片提供：

1. “E.表达荧光蛋白的大肠杆菌”，作者 Erin Rod – 自己的作品，（CC BY-SA 4.0）通过 Commons Wikimedia