正相色谱与反相色谱的区别

这 主要区别 正相色谱和反相色谱之间是 正相色谱具有极性很强的固定相和非极性流动相，而反相色谱具有非极性固定相和极性流动相。 此外，正相色谱的固定相主要是纯硅胶，流动相是氯仿等非水溶剂，而反相色谱的固定相是改性硅胶底物，具有长疏水长链和流动性相主要是水、甲醇或乙腈。

正相色谱和反相色谱是在高压下操作的两种类型的 HPLC（高效液相色谱）方法。通常，与常规液相色谱相比，它们具有更高的分辨率。

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什么是正相色谱

正相色谱是一种 HPLC 技术。它根据与吸收剂（极性二氧化硅）的相互作用程度来分离分析物。因此，这种色谱法的固定相是亲水的。它还可以与样品混合物中的亲水分子发生亲水相互作用。通常，这些相互作用包括氢键、偶极-偶极相互作用等。因此，更多的非极性分析物在固定相中停留的时间更长，从而增加了保留时间。

图 1：正相和反相色谱 - 属性

此外，正相色谱中的流动相是非极性和非水性的。因此，在过程开始时，混合物中的非极性或疏水性分析物会被流动相有效地洗掉。同时，分析物的保留时间随着流动相极性的增加而减少。此外，保留时间的重现性差是正相色谱的主要缺点。基本上，这是由于二氧化硅表面存在一层水或质子有机溶剂。然而，这在反相色谱中被消除了。

什么是反相色谱

反相色谱是一种新型的 HPLC。与正相色谱相比，它具有更高的保留时间重现性。基本上，这种重现性的提高是通过使固定相非极性来实现的。为此，将硅胶固定相的表面改性为 RMe2SiCl，其中 R 是直链烷基，例如 C18H37 或 C8H17。然而，由于固定相的非极性，与正相色谱相比，样品混合物中极性较小的分析物往往具有较长的保留时间。

图 2：反相色谱 - 洗脱

正相和反相色谱之间的相似性

正相色谱与反相色谱的区别

定义

正相色谱法是指一种分离方法，它允许混合物的组分分布在两相之间，其中一个是极性固定相，而流动相是非极性。相反，反相色谱是指分离方法，其流动相比固定相更具极性。

进化

正相色谱在 1970 年代以液相色谱的形式发展。但是，反相色谱是 HPLC 的最新发展形式。

固定相

此外，正相色谱使用极性固定相，主要是纯硅胶，而反相色谱使用非极性固定相，它是具有长疏水长链的改性硅胶基质。

流动相

正相色谱使用非极性、非水溶剂作为流动相，主要是氯仿，反相色谱使用极性流动相，主要是水、甲醇或乙腈。

分离类型

流动相中的分析物

在正相色谱中，流动相在分离开始时带有非极性分析物，而在反相色谱中，流动相带有极性分析物。

增加保留时间

非极性流动相会增加正相色谱的保留时间，而极性流动相会增加反相色谱的保留时间。

洗脱

在正相色谱中，可以通过增加流动相的极性来洗脱分析物，而在反相色谱中，可以通过降低流动相的极性来洗脱分析物。

固定相特性

正相色谱的固定相含有一层水或质子有机溶剂，而反相色谱的固定相不含水或质子溶剂层。

保留时间的重现性

柱子损坏

正相色谱柱容易损坏，反相色谱柱不易损坏。

结论

正相色谱是一种使用极性固定相和非极性流动相的 HPLC。因此，混合物中的非极性分析物很容易移出色谱柱，同时允许基于对固定相吸收剂的相互作用程度分离极性分析物。另一方面，反相色谱是一种最近的 HPLC，它使用非极性固定相和极性流动相。因此，极性分析物与流动相一起移出色谱柱，允许根据与固定相的相互作用程度分离非极性分析物。因此，正相色谱和反相色谱之间的主要区别在于固定相和流动相的类型。