Southern Northern和Western Blotting的区别

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Anonim

主要区别 Southern Northern和Western印迹之间是 Southern印迹涉及DNA的鉴定,Northern印迹涉及RNA的鉴定,而Western印迹涉及蛋白质的鉴定。

Southern、Northern 和 Western 是三种印迹技术,用于检测样品中的特定 DNA、RNA 或蛋白质分子。在印迹过程中,大分子从凝胶转移到膜上,并与有助于检测的特定核酸或抗体结合。

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什么是Southern Blotting

Southern印迹是用于检测DNA混合物中特定DNA序列的技术。 Southern印迹的基本步骤如下。

电泳 – 它通过凝胶电泳根据大小将 DNA 样品分成不同的条带。

转移 – 在转移过程中,硝酸纤维素膜与凝胶接触,DNA 条带通过毛细管作用移动到膜上。

特定序列的检测 – 膜上的目标序列与称为杂交探针的特定标记寡核苷酸序列杂交。杂交探针很短,大小为 100-500 bp,单链 DNA 分子。严格度取决于杂交缓冲液的温度和盐浓度,会影响杂交。由高温和低盐浓度定义的高严格性增加了杂交的特异性,而由低温和高盐浓度定义的低严格性降低了特异性。

图 1:Southern 印迹

Southern印迹的主要目的是检测样品中的特定DNA序列。该技术用于 DNA 指纹识别、亲子鉴定、受害者识别和犯罪识别。它还有助于识别特定基因,在 RFLP(限制性片段长度多态性)、基因重排、遗传疾病和传染性病原体的突变和识别中。

什么是Northern Blotting

Northern印迹是用于检测RNA混合物中特定RNA的技术。 Northern Blot的基本步骤如下。

电泳 – 它根据大小将 RNA 样品分成不同的条带。

转移 – 通过毛细作用,凝胶中的 RNA 带被转移到膜上。

检测特定序列 – 通过与由 DNA 组成的标记寡核苷酸探针杂交来检测目标 RNA 序列。

图 2:Northern 印迹

由于 Northern 印迹可以识别样品中的特定 RNA 序列,因此可用于基因表达研究。它还可以帮助诊断疾病。

什么是蛋白质印迹

蛋白质印迹是一种用于检测蛋白质混合物中特定氨基酸序列的印迹技术。 Western Blot 的基本步骤如下。

电泳 – 通过 SDS PAGE 根据大小将单个蛋白质分离成条带。

转移 – 通过印迹将凝胶中的蛋白质条带转移到膜上。

特定蛋白质的检测 – 带有分离蛋白质的膜与仅结合特定蛋白质的一抗一起孵育。用辣根过氧化物酶 (HRP) 或碱性磷酸酶等酶标记的二抗用于检测一抗。当与底物一起孵育时,酶作用使抗体与膜上特定区域的结合可视化。

图 3:蛋白质印迹

蛋白质印迹也称为蛋白质印迹或免疫印迹。它可以识别样本中蛋白质的数量、血清中细菌和病毒的存在以及血清中是否存在 HIV 抗体。它还可以检测有缺陷的蛋白质。此外,蛋白质印迹法是乙型肝炎、克雅氏病、莱姆病和疱疹的最终检测方法。

南北方和西方印迹之间的相似之处

Southern Northern和Western Blotting的区别

定义

Southern印迹是指识别特定DNA序列的程序,而Northern印迹是指用于通过与互补DNA杂交检测特定RNA序列的Southern印迹程序的改编,而Western印迹是指用于识别特定氨基的印迹程序。 -蛋白质中的酸序列。

由开发

Southern 印迹是由 Edward M. Southern 于 1975 年开发的。 Northern印迹是由 Alwine 及其同事于 1979 年开发的,Western 印迹是由斯坦福大学的 George Stark 团队于 1979 年开发的。

检测到的分子

Southern印迹检测特定的DNA序列,Northern印迹检测特定的RNA序列,而Western印迹检测特定的蛋白质。

凝胶电泳

Southern印迹涉及琼脂糖凝胶电泳,Northern印迹涉及使甲醛琼脂糖凝胶变性,而Western印迹涉及SDS PAGE。

印迹法

南印迹和北印迹都涉及毛细管转移,而蛋白质印迹涉及电转移。

探头

Southern印迹使用DNA探针,而Northern印迹使用cDNA探针,Western印迹使用一抗和二抗。

应用

Southern印迹用于识别特定基因序列和DNA指纹。 Northern印迹用于基因表达分析,而Western印迹用于疾病诊断。

结论

Southern印迹鉴定特定的DNA序列,而Northern印迹鉴定特定的RNA序列,而Western印迹鉴定样品中的特定蛋白质序列。因此,三种印迹技术之间的主要区别在于它们检测的大分子类型。

参考:

1.“Southern Blotting:原理、程序和应用-”在线生物学笔记,2017 年 12 月 4 日,可在此处获取2。 Kochunni、Deena T 和 Jazir Haneef。 “Northern Blotting:原理、程序和应用。”生物考试 4 U,可在此处获得 3。 “Western Blotting 技术:原理、程序和应用——”生物学在线笔记,2017 年 12 月 4 日,可在此处获取

图片提供:

1. “图 17 01 05” 作者:CNX OpenStax – (CC BY 4.0) 通过 Commons Wikimedia2。 Ilewieszoośmiornicach 的“Northern 印迹图” – 通过 Commons Wikimedia 自己的作品(CC BY-SA 4.0) 3. Cawang 的“西方印迹” – 通过 Commons Wikimedia 自己的作品(CC0)

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